如何阅读分析质粒图谱.doc
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如何阅读分析质粒图谱 ，病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori?即控制复制起始的位点。
原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。
而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。
抗生素抗性基因可以便于加以检测,如Amp+...欢迎下载！
如何阅读分析质粒图谱 标签:图谱质粒阅读2009-09-0114:12 载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori?即控制复制起始的位点。
原核生物DNA分子中只有一个复制起 始点。
而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。
抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+?,Kan+ 多?克隆位点MCS克隆携带外源基因片段 P/E?启动子/增强子 Terms终止信号? 加poly（A）信号?可以起到稳定mRNA作用
二、如何阅读质粒图谱
第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）
第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。
（1）Ampr水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。
（2）tetr可以阻止四环素进入细胞。
（3）camr生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
（4）neor（kanr） 氨基糖苷磷酸转移酶使G418（长那霉素衍生物）失活 （5）hygr使潮霉素β失活。
第三步：看多克隆位点（MCS）。
它具有多个限制酶的单一切点。
便于外源基因的 插入。
如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。
决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源DNA插入片段大小。
质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA 片段。
一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。
第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录 终止信号。
这是用来区别克隆载体与表达载体。
克隆载体中加入一些与表达调控 有关的元件即成为表达载体。
选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。
启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序 的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启 动子本身不被转录。
? 增强子/沉默子－为真核?基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近 基因转录过程的调控顺序。
其
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追梦人
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